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鱉甲煎丸對荷瘤小鼠抑瘤作用及胸腺指數、脾指數的影響
目的：研究鱉甲煎丸對荷瘤小鼠抑瘤作用及胸腺指數、脾指數的影響。方法：分設鱉甲煎丸高、低劑量組對H22荷瘤小鼠連續15天灌胃給藥後，測其抑瘤率及胸腺指數、脾指數，與環磷 胺組比較。結果：鱉甲煎丸有較好的抑瘤作用，高劑量組達到31.8％。鱉甲煎丸對H22荷瘤小鼠的胸腺、脾臟有保護作用。結論：鱉甲煎丸在抗腫瘤方面具有廣闊的前景。
[關鍵詞] 鱉甲煎丸；H22荷瘤小鼠；抑瘤率；胸腺指數；脾指數
經方鱉甲煎丸為醫聖張仲景所創，原用於治療“癥瘕”、“瘧母”病證。由於該方具有寒熱並用、攻補兼施、行氣化瘀、軟堅散結之功，目前廣泛應用於肝癌、胃癌及卵巢囊腫等疾病。但因該方用藥味數多，許多藥物臨床罕用，且製劑獨特，所以對該方的研究僅限於臨床病案報道。缺乏現代科學依據，勢必妨礙其進一步推廣運用。故筆者透過對該方的實驗研究，旨在闡明鱉甲煎丸的抗腫瘤作用，探討其抗腫瘤機制，為其臨床應用提供現代科學依據。
1 材料
1.1 藥物 鱉甲煎丸，杭州胡慶餘堂有限公司，批號020602。環磷 胺，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號02071121。
1.2 動物及瘤株 昆明種小鼠，購於廣州中醫藥大學動物中心，純雄性，18∼22g。 H22小鼠肝癌，購於中山醫科大學腫瘤研究所。
2 實驗方法
2.1 鱉甲煎丸藥液的製備 用蒸餾水將鱉甲煎丸分別配成每毫升含0.048g 、0.024g生藥的高、低兩個劑量組的懸濁液，4℃冰箱保存，用時搖勻。
2.2 腫瘤模型 選擇接種瘤細胞後10ｄ的小鼠頸椎脫臼處死，固定於蠟板上，無菌抽取乳白色腹水液，以0.9%氯化鈉溶液1：1稀釋，經0.2％台盼蘭染色後計算活細胞數>95%，調整瘤細胞懸液濃度為6×106/ ｍｌ個瘤細胞，每隻小鼠右後肢皮下接種0.2ml。24小時後用藥。
2.3 分組 將荷瘤小鼠隨機分成4組，每組11隻。即：鱉甲煎丸高劑量組、鱉甲煎丸低劑量組、陰性對照組及環磷 胺組。
2.4 給藥 鱉甲煎丸高、低劑量組分別按12g/kg.d-1、6g/kg.d-1灌胃，陰性對照組給相同劑量的蒸餾水灌胃，環磷 胺組按20mg/kg.d－1腹腔注射。連續用藥15天后停藥處死，稱取瘤重。
2.5 取材 處死小鼠後剝離瘤塊用濾紙吸幹後稱重；取齣小鼠脾臟和胸腺，用濾紙吸幹後稱重。
2.6 評定指標（1）腫瘤抑制百分率（抑瘤率）：抑瘤率（％）＝ （2）比較各組小鼠實驗前後體重的變化情況；（3）胸腺指數、脾指數：其測量方法同文獻[1]。
2.7 統計學方法 用SPSS11.0統計軟體做單向方差分析。
3 結果
3.1 鱉甲煎丸對H22移植性腫瘤的抑製作用 如表1所示，鱉甲煎丸高劑量組和鱉甲煎丸低劑量組的抑瘤率與陰性對照組均有顯著性差異（p 0.01）；鱉甲煎丸高劑量組與鱉甲煎丸低劑量組的抑瘤率間亦有顯著性差異（p 0.05）；鱉甲煎丸高劑量組與環磷 胺組比較其抑瘤率無顯著性差異（p>0.05）。
表1鱉甲煎丸對H22移植性腫瘤的抑製作用（ ）
|
組別 |
n始 末 |
瘤重（g） |
抑瘤率（％） | |
|
陰性對照組 |
11 |
11 |
7.92±0.48 |
－ |
|
環磷 胺組 |
11 |
11 |
5.20±0.71* |
34.3 |
|
鱉甲煎丸高劑量組 |
11 |
11 |
5.41±0.59* |
31.8 |
|
鱉甲煎丸低劑量組 |
11 |
11 |
6.28±0.54* |
20.8 |
與陰性對照組比較： p 0.01
與鱉甲煎丸低劑量組比較： p 0.05 p 0.01
3.2荷瘤小鼠在實驗前後的體重變化 用藥前各組小鼠體重無顯著性差異（p>0.05）；用藥後與環磷 胺組比較，陰性對照組、鱉甲煎丸高劑量組、鱉甲煎丸低劑量組的小鼠體重均有顯著增加（p 0.01）；陰性對照組、鱉甲煎丸高劑量組與鱉甲煎丸低劑量組比較，亦有顯著性差異（p 0.01）；鱉甲煎丸高劑量組與陰性對照組比較無顯著性差異（p>0.05）。見表3。
表2荷瘤小鼠在實驗前後的體重變化（ ）
|
組別 |
n |
劑量（g/kg） |
體重(g)
用藥前 用藥後 前後差 | ||
|
陰性對照組 |
11 |
－ |
20.55±1.44 |
32.81±2.14*▲ |
12.27±1.49*▲ |
|
環磷 胺組 |
11 |
20 |
21.36±0.81 |
28.63±1.43 |
7.27±1.27 |
|
鱉甲煎丸高劑量組 |
11 |
12 |
20.45±0.93 |
31.90±1.04*▲ |
11.45±0.69*▲ |
|
鱉甲煎丸低劑量組 |
11 |
6 |
20.55±1.37 |
30.09±1.14 |
9.55±0.82* |
與環磷 胺組比較： p 0.05 * p 0.01
與鱉甲煎丸低劑量組比較：▲ p 0.01
3.3 鱉甲煎丸對荷瘤小鼠胸腺指數和脾指數的影響 與環磷 胺組相比，鱉甲煎丸高劑量組、鱉甲煎丸低劑量組對荷瘤小鼠胸腺指數和脾指數均有顯著性提高；鱉甲煎丸高劑量組、鱉甲煎丸低劑量組與陰性對照組的胸腺指數、脾指數相比無顯著性差異（p>0.05）；對胸腺指數的提高來講，鱉甲煎丸高劑量組比鱉甲煎丸低劑量組有顯著性差異（p 0.05）。如表3所示。
表3鱉甲煎丸對荷瘤小鼠胸腺指數和脾指數的影響（ ）
|
組別 |
n
始 末 |
劑量
（g/kg） |
胸腺指數
(mg/g) |
脾指數
(mg/g) | |
|
陰性對照組 |
11 |
11 |
0 |
0.85±0.17* |
8.52±1.48* |
|
環磷 胺組 |
11 |
11 |
20 |
0.51±0.20 |
6.32±1.03 |
|
鱉甲煎丸高劑量組 |
11 |
11 |
12 |
0.99±0.36* |
8.24±1.26* |
|
鱉甲煎丸低劑量組 |
11 |
11 |
6 |
0.72±0.10 |
7.52±0.89 |
與環磷 胺組比較： p 0.05 * p 0.01
與鱉甲煎丸低劑量組比較： p 0.05
4 討論
鱉甲煎丸是經典的抗腫瘤方，其廣泛的應用於臨床。但有關其實驗研究、機理探討方面的報道不多。本實驗透過用環磷 胺作為陽性對照藥，來闡明鱉甲煎丸的抗腫瘤效果。環磷 胺是臨床常用的化療藥，其能有效地殺傷癌細胞（本實驗其抑瘤率達到34.3％），但與此同時也對人體產生不同程度的毒副作用其中主要有骨髓抑制、免疫功能低下和白細胞減少症[2]。藥效方面，鱉甲煎丸高劑量組抑瘤率達到31.8%，鱉甲煎丸低劑量組亦達到20.8％。鱉甲煎丸高劑量組平均瘤重與環磷 胺組平均瘤重無顯著性差異，其與低劑量組平均瘤重存在顯著性差異（p 0.05）。這說明鱉甲煎丸在抗腫瘤方面療效顯著，並且存在著量效關係。本實驗還透過實驗前後各組體重變化以及胸腺指數、脾指數的比較，說明瞭環磷 胺的毒副作用；同時提示鱉甲煎丸對小鼠免疫器官無損害作用，顯示了鱉甲煎丸抗腫瘤的優越性，體現了中醫藥理論上的整體觀念。
鱉甲煎丸的抗腫瘤機理可能是透過促進宿主免疫功能來實現的。本實驗也顯示了鱉甲煎丸能增加荷瘤小鼠胸腺和脾臟的重量。總之，鱉甲煎丸既能有效抑制腫瘤的生長又能提高宿主免疫功能從而達到攻邪扶正之效，其有廣闊的抗腫瘤前景。
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